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由于酵母对重组表达的蛋白质有真核细胞相似的翻译后修饰的功能，同时又有培养成本低廉的优点，所以酵母成为研究蛋白相互作用和真核基因表达的重要工具，因此快速从酵母中提取所需要的蛋白成为一个很重要的步骤，由于酵母有坚硬的细胞壁，传统的提取采用强碱，使得大多数蛋白产生变性，而玻璃珠法蛋白提取会使得玻璃珠对蛋白产生一定的非特异性吸附作用，导致蛋白质的损失，该一步法酵母蛋白提取试剂采用一种温和型的非离子去污试剂可在20min内从酵母细胞中提取可溶型蛋白，而且绝大多数蛋白可以保持活性，通过对毕赤酵母的可溶性蛋白提取表明，该方法提取效率要高于传统的玻璃珠法。

• 不需要剧烈的的机械磨碎和长时间的破壁酶对其进行消化，比较适用于酵母胞内表达的重组蛋白的快速筛选；
  
• 可以从20×50mg的湿重新鲜或冻存的酵母中提取所需要的可溶性蛋白质，而且绝大多数蛋白可以保持活性；
  
• 提取的蛋白质可以透析去除非离子型去污试剂或将缓冲液替换为所需要的目的蛋白质的合适缓冲液；
  
• 该试剂盒所用提取试剂也可用于大肠杆菌等G阴性细菌中的可溶性蛋白质的提取。

• 请在实验前加入一定浓度的DTT和蛋白酶抑制剂到提取试剂中，使得DTT的终浓度为0.02M。
  
• 对于毕赤酵母(Pichia pastoris)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，请适当提高DTT浓度到20～100mM，以提高可溶性蛋白的提取效率或将步骤3中的摇床温度提高到42℃后再进行提取。
  
• 由于各种蛋白质的结构，可溶性和稳定性不同，该试剂盒所提供的缓冲液(含有一定浓度的盐份)并不一定是该蛋白质的最佳缓冲液，这时可以透析去除盐离子或去污剂或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
  
• 如果用于大肠杆菌等G阴性细菌中的可溶性蛋白质的提取，请按照每克湿重菌体加入5mL提取液进行提取。
  
• 在对酵母蛋白提取时，通过离心沉淀所收集的酵母最好处于指数生长期，位于指数生长后期的酵母在提取时，提取效率会下降。此时对于毕赤酵母(Pichia pastoris)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)可以将步骤3中的摇床温度提高到42℃后再进行提取。
  
• 如果必要，请在提取前加入一倍浓度的磷酸酶抑制试剂(GS1415或GS1416或GS1417)，再进行酵母蛋白质的提取。
  
• 由于该提取液中加入了一定量的高浓度DTT和非离子型去污试剂，可以使用我司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒(GS1485)或改良性Lowry法蛋白浓度测定试剂盒(GS1487)对所提取的蛋白质进行定量.
  
• 提取前，反复冻溶酵母菌有助于提高可溶性蛋白的提取效率。
  
• 可以使用Sephadex重力型脱盐柱(GS1466)脱盐或将缓冲液替换为所需要的目的蛋白的合适缓冲液。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 如果用于蛋白质质谱研究，请用我司生产的铜染(GS1532)或锌染(GS1534)或质谱用快速银染试剂盒(GS1419)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液(GS1479)或高灵敏考马氏亮蓝染色液(GS1549)或通用型蛋白染色液(GS2027)进行染色。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后，请旋紧瓶盖防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。

• 5000rpm(2500g)室温离心2min，收集处于指数生长期的酵母菌，弃掉上清，称量潮湿酵母的重量，收集的酵母也可以置于-20℃或-80℃的条件下保存留待以后提取。
  
• 向每50mg湿重的菌体中加入500μL的提取试剂(每毫升的提取试剂加入1μL的蛋白酶抑制剂和20μL DTT，10μL PMSF)，用枪头反复吹打均匀。
  
• 盖上离心管的盖子，将其放置在脱色摇床上280rpm室温振荡20min左右。
  
• 13000rpm(15000g)离心15min，收集酵母细胞碎片，将上清转移到一个新的离心管中，作为可溶性蛋白质部分，此时有60%以上的可溶性蛋白被提取出来。
  
• 如果要进一部增加蛋白质的提取效率，可以按照步骤2~4的方法再次提取，合并两次提取所得到的上清，将上清用于蛋白质分析，纯化或定量。